Cell3iMager duos2 アプリケーションノート

近年、創薬開発やがん研究分野においてNK（Natural Killer）細胞が注目されています。NK細胞は自然免疫で働くリンパ球の一種であり、特に腫瘍細胞やウイルス感染細胞の除去に主要な役割を果たしています。Cell3iMager duos / duos2およびDeep Learningプラグインを使用した明視野解析により、長期間のKilling Assayを行うことができるようになります

嚢胞性線維症患者より樹立されたiPS細胞から分化誘導した気道上皮オルガノイドを用いて、フォルスコリンアッセイを行い、そのフェノタイプをラベルフリーイメージングで捉えることができました。また、ディープラーニングでオルガノイド領域をセグメンテーションし、面積を計測することでオルガノイドの膨張率を定量しました。

Cell3iMager duosおよびディープラーニングを用いてヒトiPS細胞由来交感神経細胞の明視野解析ができることを確認しました。従来の画像処理方法に比べてロバスト性が高く、明るさの違いがあったり、デブリの存在下でも、細胞を正確に抽出することが可能です。また、アポトーシスが誘導された細胞も抽出することが可能なため、培養を続けながら生細胞と死細胞を定量的に評価することが可能となります。このことから、細胞の増殖性や品質の評価をラベルフリーで行うことが可能であり、例えば、神経細胞への長期的な薬剤暴露試験などに応用できる可能性があります。

三次元培養したオルガノイドの明視野/蛍光イメージングが可能になります。また、ディープラーニングを用いることで、オルガノイド形状毎のセグメンテーションが可能であるため、これまで顕微鏡観察で行ってきたオルガノイド成長過程のモニタリングをラベルフリー解析で代替できる可能性があります。同様に、ATPアッセイや蛍光染色で行ってきた毒性評価、FISアッセイなどをラベルフリー解析で代替できる可能性があります。

ハイブリドーマ4B2細胞の1細胞クローニングをCell3iMager duosを用いて行った。

HCT116細胞の1細胞クローニングをCell3iMager duosを用いて行った。

単層培養した細胞を蛍光染色することによって細胞数の計測を行った。

単層または三次元培養時におけるHypoxiaレベルをHypoxia probeによる蛍光染色で定量比較した。

神経成長因子（β-NGF）を添加したPC12細胞の分化効率をCell3iMager duosを用いてラベルフリーで定量した。

EZSPHERE®プレートでスフェロイドを作製し、ディープラーニング機能によりラベルフリー解析を行った。

抗がん剤（Taxol）処理したU937細胞の生存率をCalcein-AMとPIによる蛍光撮像により解析した。

抗がん剤（Cisplatin）処理したがん細胞の生存率をCell3iMager duosを用いて ラベルフリーで定量した。

FCeM培地中で培養されたスフェロイドをCell3iMager duosを用いて ラベルフリーで定量した。

Matrigel中で培養されたスフェロイドをCell3iMager duosを用いて ラベルフリーで定量した。

段階的な細胞数で細胞を播種し、Cell3iMager duosを用いて 細胞密度を定量化した。

浮遊培養細胞数をCell3iMager duosを用いてラベルフリーで定量した。

Cell3iMager duosを用いて、悪性度の異なる乳がん細胞の浸潤能を比較した。

Cell3iMager duosを用いて、３次元培養下TCF4/LEFレポーター活性をGFP蛍光強度で定量化し、薬剤スクリーニングを行った。その結果、Wntシグナル阻害活性を示す化合物Sが大腸がん治療薬の候補として同定された。

CORNING社のマイクロウェルプレートCorning®Elplasia®で培養したスフェロイドをCell3iMager duosを用いて撮像・解析を行った。

単層／三次元培養された細胞の増殖率をCell3iMager duosを用いてラベルフリーで定量した。

がん細胞をCell3iMager duosを用いてラベルフリーでコロニーフォーメーションアッセイ（CFUアッセイ）を行った。

Anti-Fas抗体により細胞死を誘導したJarkat細胞についてCell3iMager duosとDeep Learingを用いて形態分類を行った